课程编码：

011211

课程名称：

基因工程实验

学分：

1.5

总学时：

48

理论学时

0

实验学时

48

课程类别：

专业方向教育平台课

课程性质：

必修课

适用层次：

汉族本科

开课学期：

第 6 学期

适用专业：

生物技术

序号

项目

名称

实验目的与内容

学

时

实验

性质

实践

类型

主要仪

器设备

1

DNA的PCR

扩增及琼脂糖凝胶电泳检测

目的：掌握DNA的PCR扩增原理；PCR仪、移液器的使用方法；熟悉PCR反应中各种组分的含量及作用；琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理；

内容：以含有目的基因片段的质粒为模板，

用PCR仪进行体外扩增，并用琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。

5

必修

设计型

PCR仪，移液器，离心机，水平电泳仪

2

DNA重组及转化

目的：掌握DNA重组的原理；CaCl₂法制备大肠杆菌感受态细胞的原理及方法；重组子的筛选原理；

内容：利用T-A克隆进行DNA重组，制备大肠杆菌感受态细胞的，用冻融法将重组基因转化大肠杆菌感受态细胞，转化子的筛选及

实验记录；

5

必修

基础

离 心机， 制冰机， 摇床， 超净工作台，

移液器

3

重组质粒的提取

目的：掌握碱裂解法提取质粒的原理及方法；

内容：制备碱裂解法提取质粒的试剂；挑取

阳性转化子进行增菌培养；用碱裂解法提取质粒；用并用琼脂糖凝胶电泳检测质粒。

4

必修

基础

高速冷冻离心

机，移

液器，

水平电泳仪

4

限制性内切酶酶切鉴定重组质粒

目的：掌握酶切条件，熟悉限制性内切酶的酶切原理；学习甘油管和穿刺管的制作与保存。

内容：用相应的限制性内切酶对重组质粒进行酶切；用琼脂糖凝胶电泳检测重组质粒的酶切鉴定结果；将阳性重组子保存成甘油管

（-70℃）和穿刺管（4℃）；

2

必修

基础

离 心机， 恒温水浴锅， 移液器， 水平电泳仪

5

原核表达载体的构建、原核表达及原核表达 蛋 白 的SDS-PAGE检

测鉴定

目的：1掌握原核表达载体选择及构建的理论基础；

2掌握IPTG诱导蛋白表达的原理及方法；

3掌握SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）检测蛋白的原理及方法；

内容：

1提取原核表达载体的质粒并用相应的限制性内切酶进行消化；

2用琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物，回收载体片断；

3用相应的限制性内切酶消化重组质粒，并回收目的基因；

4将目的基因和载体片断在T4连接酶的作用下进行连接，将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞，筛选阳性重组子；

5提取阳性重组质粒，并转化大肠杆菌感受态细胞，在IPTG诱导下使其原核表达；

6配置聚丙烯酰胺凝胶电泳所用的浓缩胶、分离胶试剂和上样缓冲液；

7学习垂直板电泳槽的使用方法；

8用SDS-PAGE分离原核表达蛋白；

9学习对聚丙烯酰胺凝胶的染色和脱色方法；

10用凝胶成像系统检测原核表达结果，做

实验纪录；

12

必修

综合型

离 心机， 摇床， 超净工作台， 超声破碎仪， 垂直板电泳槽， 微量注射器，移液器

6

植 物 基 因 组

DNA的提取

目的：掌握改良的CTAB法提取植物DNA

的原理和方法；

内容：1．配置CTAB法提取植物DNA的提取液；

2.选取植物叶片提取其基因组DNA；

3.将提取物用琼脂糖凝胶电泳进行分离；

4.用凝胶成像系统检测提取结果并作记

录；

6

必修

设计型

高速冷冻离心机， 制冰机，移 液器， 水平电泳仪

7

基 因 叶 器 官

目的：1.掌握Trizol法提取模式植物（如拟

12

必修

设计

高速冷

RNA的提取及反转录

南芥）总RNA的方法；

2.掌握异硫氰酸胍法提取组分复杂植物总RNA的方法；

内容：1.用DEPC水处理离心管、枪头， 实验准备；

2.用Trizol法提取模式植物（如拟南芥）总

RNA；

3.配置异硫氰酸胍法提取植物总RNA所需的试剂；

4.RNA提取；

5.琼脂糖凝胶电泳检测所提取的RNA质量

6.反转录，并通过RT-PCR或qRT-PCR检测植物内参基因及目的基因的表达量。

；

型

冻离心机， 制冰机，移 液器， 水平电泳仪

8

利用农杆菌介导法进行基因转基因

目的：1. 掌握农杆菌介导法转化植物的原理和方法；

2.了解植物转基因时外植体的选择；内容：1.植物无菌苗的培养；

2.农杆菌侵染外植体及其共培养；

3.拟南芥花絮侵染法转基因及其培养；

2

选修

演示型

超净工作台